Результаты мониторинга за иксодовыми клещевыми боррелиозами в Крыму (2015–2021 гг.)

Введение. Природные очаги иксодового клещевого боррелиоза (ИКБ) – болезни Лайма (БЛ) широко распространены в лесной ландшафтной зоне умеренного климатического пояса северного полушария на Европейском, Азиатском и Американском континентах. Возбудители ИКБ – боррелии комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato – включают более 20 генотипов. Одним из резервуаров Borrelia burgdorferi sensu lato являются мелкие млекопитающие [1][2], являющиеся прокормителями иксодовых клещей, которые играют роль не только основных переносчиков, но и в некоторых случаях резервуаров ИКБ, так как у них возможна трансовариальная передача возбудителя [3][4].

Эпидемическая ситуация по ИКБ в Российской Федерации на протяжении последнего десятилетия оценивается как напряженная и занимает одно из ведущих мест по уровню заболеваемости и социально-экономическому ущербу среди трансмиссивных природно-очаговых инфекций. Ежегодно регистрируется от 6 до 10 тыс. случаев заболевания БЛ [5–7]. В России основное эпидемическое значение имеют клещи Ixodes ricinus, Ixodes persulcatus, не исключается участие в поддержании циркуляции возбудителей ИКБ в природных очагах и других видов иксодовых клещей [8–11].

Изучение боррелиозов и официальная регистрация заболеваемости в Крыму начались с 2000 г., и ежегодно отмечается рост числа случаев БЛ у людей. Так, за период 2000–2014 гг. в Крыму зарегистрировано 204 случая БЛ [12], а за период 2015–2021 гг. – 324 случая. На полуострове Крым выделяют две зоны риска инфицирования возбудителем ИКБ у людей: зона высокого риска и зона низкого риска. К зоне высокого риска относятся центральные и южные территории полуострова, расположенные в горнолесной (в том числе предгорной лесостепной) зоне Крыма [13]. Уровень заболеваемости БЛ в районах, расположенных в этой зоне, составляет 0,67–7,72 на 100 тыс. населения. К зоне низкого риска относятся западные, восточные и северные территории полуострова, расположенные в степной зоне Крыма. Уровень заболеваемости БЛ в районах, расположенных в этой зоне, составляет 0,00–2,94 на 100 тыс. населения [14].

Две основные зоны крымского полуострова (степная и горно-предгорная) имеют климатические особенности, а также различия в флоре и фауне.

Степная зона занимает 70 % территории полуострова. Климат засушливый и умеренно-континентальный. Зимы бесснежные и мягкие, с частыми оттепелями и небольшими морозами. Лето жаркое, в это время тут отмечается минимум атмосферных осадков [15][16].

Горно-предгорная зона занимает около 30 % территории Крыма. Климат существенно отличается в зависимости от конкретных высот и особенностей той или иной гряды. Непосредственно у моря располагается главная цепь, которая является природным барьером для горячего воздуха с центральной части полуострова, создавая на побережье мягкий средиземноморский климат, зимой тут температура стабильно плюсовая, лишь при редких похолоданиях выпадает снег, который быстро тает. Летом же стоит всегда теплая безветренная ясная погода. Для этой климатической зоны характерны кратковременные обильные дожди. На горных перевалах климат влажный и умеренно холодный, зимой может быть достаточно холодно. Растительность в предгорьях степная – ковыль, типчак, пырей, на юг с восхождением над уровнем моря сменяется на лесостепную. Климат теплый и полувлажный. В горно-предгорной зоне определяется большее биологическое многообразию флоры и фауны, чем в степной зоне¹ [17].

Цель исследования – выявление особенностей распространения ММ и иксодовых клещей, участвующих в циркуляции патогенных для человека боррелий, на территории Крыма.

Материалы и методы. Анализировали результаты исследований, проведенных с 2015 по 2021 г. Статистическая информация о заболеваемости ИКБ и укусах клещами получена в рамках Соглашения о сотрудничестве между Межрегиональным управлением Роспотребнадзора по Республике Крым и г. Севастополю, ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Крым и г. Севастополе» и ФГКУЗ «Противочумная станция Республики Крым» Роспотребнадзора от 20.04.2015².

Сбор иксодовых клещей проводился по стандартной методике на флаг, численность определяли пересчетом количества собранных экземпляров за 1 флаго-час (ф-ч), а также путем снятия их с животных³. Отработано 324 ф-ч, собрано 6510 экз. (20,1 экз. на 1 ф-ч) иксодовых клещей; с животных (КРС, МРС, лошади) снято 6385 экземпляров. В горно-предгорной зоне было собрано и снято с животных 5081 экз. (1239 пулов) (44,3 % от общего количества добытых клещей). В степной зоне полуострова было собрано и снято с животных 6395 экз. (1385 пулов) иксодовых клещей (57,7 % от общего количества добытых клещей).

Учеты и отлов ММ проводился по стандартной методике с помощью давилок Геро методом ловушко-линий (ловушки выставлялись линиями по 50 шт. в разных стациях)⁴. Исследование ММ на ИКБ проводилось с 2017 г. За период 2017–2021 гг. было отработано 17 215 ловушко-суток (л-с) и отловлено 1548 экз. ММ (8,99 экз. на 100 л-с), из них на территории степной зоны полуострова – 1035 экз. ММ, в горно-предгорной – 513 экз.

Полевой материал доставлялся в лабораторию, где проводилось их видовое определение, пулирование (иксодовые клещи), приготовление суспензии клещей, вскрытие (ММ) и отбор проб (внутренние органы (печень и селезенка) и головной мозг) для последующего лабораторного исследования⁵. Все стадии исследования соответствовали законодательству Российской Федерации, международным этическим нормам и нормативным документам учреждения. Для каждого вида вычислялся индекс доминирования (ИД), отражающий отношение числа особей (ni) какого-либо вида к общему числу видов (N) в биоценозе [16]:

Все приготовленные пробы иксодовых клещей и ММ исследовались на наличие возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов (методы: полимеразная цепная реакция с детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени» (ПЦР)).

Постановка ПЦР проводилась в три этапа, включающих в себя экстракцию РНК/ДНК из исследуемых образцов (комплект реагентов для экстракции РНК/ДНК «Рибо-преп» (Россия, г. Москва)), реакцию обратной транскрипции (комплекта реагентов «Реверта-L» (Россия, г. Москва)) и амплификацию специфических генов, с учетом продуктов амплификации в режиме реального времени. Для амплификации участков исследуемых генов использовались следующие наборы реагентов:

• набор реагентов для обратной транскрипции и амплификации Borrelia burgdorferi s.l., (Россия, г. Москва);
• набор реагентов для выявления РНК/ДНК возбудителей инфекций, передающихся иксодовыми клещами TBEV, Borrelia burgdorferi s.l., Anaplasma phagocytophillum, Ehrlichia chaffeensis / Ehrlichia muris, в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® TBEV, B. burgdorferi s.l., A. phagocytophilum, E. chaffeensis / E. muris-FL», (Россия, г. Москва).

Исследование методом ПЦР проводилось на амплификаторе ROTOR-GENE Q 6000, (Германия).

Картографирование пространственного распределения положительных находок возбудителя БЛ проводилось с применением геоинформационных технологий.

Результаты

Результаты исследования иксодовых клещей. За период 2015–2021 гг. сбор и исследование клещей проводились на всех административных территориях Крыма, расположенных в горно-предгорной и степной ландшафтных зонах.

Видовое разнообразие иксодовых клещей, собранных в этот период, представлено 12 видами (Dermacentor marginatus – 2,4 %, Dermacentor reticulatus – 2,8 %, Haemaphysalis concinna – 0,01 %, Haemaphysalis inermis – 0,1 %, Haemaphysalis otophila (parva) – 3,7 %, Haemaphysalis punctata – 19,5 %, Hyalomma marginatum – 19,99 %, Hyalomma scupense – 0,9 %, Ixodes redikorzevi – 0,1 %, Ixodes ricinus – 11,1 %, Rhipicephalus bursa – 22,5 %, Rhipicephalus sanguineus – 16,9 %). Эти виды клещей имеют мозаичное распространение по всей территории полуострова с преобладанием некоторых видов в определенной природной зоне.

Наибольшая численность клещей (показатель средней численности клещей на 1 ф-ч) в Крыму определялась в Ленинском районе (40,8 экз. на 1 ф-ч) и далее по убыванию: г/о Ялта (33,2), г/о Феодосия (26,4), Бахчисарайский район (20,5), Нижнегорский район (20,5), Красногвардейский район (18,7), Кировский район (18,6), Симферопольский район (17,9), Советский район (17,8), Черноморский район (16,3), Красноперекопский район (15,9), г/о Алушта (15,4), г. Севастополь (15,3), Сакский район (13,9), Первомайский район (12,0), Раздольненский район (11,1), г/о Судак (10,4), Джанкойский район (10,1), Белогорский район (8,3).

Высокая численность клещей в Ленинском районе (относится к степной зоне), возможно, связана с тем, что природные местообитания этого района наименее подвергаются антропогенному преобразованию (невспаханная степь, нет акарицидной обработки) и в основном используются для выпаса крупного рогатого скота – прокормителя наиболее распространенных видов клещей в данном районе).

Количество пулов иксодовых клещей, содержащих возбудитель БЛ, за период исследования (2015–2021 гг.) составило 3,8 % (101 пул). При этом в горно-предгорной зоне зарегистрировано 91,1 %, в степной зоне 8,9 % (табл. 1).

Из 92 пулов иксодовых клещей, собранных в горно-предгорной зоне, содержащих маркеры возбудителя БЛ, 8 пулов (8,7 %) сняты с животных (5 – с лошади (D. marginatus, D. reticulatus, H. marginatum), 3 – с ММ (I. ricinus)). Из 9 положительных находок в пулах иксодовых клещей, собранных в степной зоне, 6 пулов (66,7 %) сняты с животных (5 пулов с ММ (I. ricinus, I. redikorzevi), 1 – КРС (I. redikorzevi). При этом маркеры боррелий не были обнаружены в материале от ММ, на которых были сняты инфицированные клещи.

Результаты исследования ММ. Средняя численность ММ в степной зоне составила 9,8 экз. на 100 л-с, в горно-предгорной – 7,7 экз. на 100 л-с). Положительные пробы от ММ были выявлены только в степной зоне полуострова в 5,8 % от всех исследованных особей, отловленных на этой территории (табл. 2). Наибольшее количество положительных находок было выявлено у белозубок (род Crocidura), серых хомячков (Cricetulus migratorius), обыкновенной полевки (Microtus arvalis (obscurus)), серой крысы (Rattus norvegicus), единичные – у общественной полевки (Microtus socialis), домовой (Mus musculus) и степной мышей (Sylvaemus witherbyi).

Таким образом, все положительные на Borrelia burgdorferi s.l. находки проб от ММ зарегистрированы в степной зоне полуострова, несмотря на то что ареалом обитания эпидзначимых ММ является весь Крымский полуостров. При этом число положительных проб клещей в горно-предгорной зоне в 12,3 раза больше, чем в степной.

В динамике положительных находок на ИКБ в иксодовых клещах и ММ по годам отмечается тенденция к увеличению, что может способствовать росту числа заболеваний людей БЛ. Так, если в 2018 г. удельный вес положительных находок составлял 2,7 (иксодовые клещи) и 1,6 % (ММ), то в 2019 г. эти показатели были 4,8 и 1,9 %, в 2020 г. проводились исследования на ИКБ только ММ1, в 2021 г. 7,0 и 5,8 % соответственно.

В целом наблюдается тенденция увеличения количества положительных находок ИКБ в ММ и иксодовых клещах (рис. 1).

Обсуждение. Целенаправленное исследование иксодовых клещей из природных стаций на наличие возбудителей БЛ на территории Крымского полуострова начало проводиться с 2015 г., а ММ – с 2017 г. Положительные находки возбудителя БЛ в пробах иксодовых клещей и/или ММ были зарегистрированы на территории всех административных районов Крыма (кроме Кировского района) (рис. 2).

Ранее эндемичными территориями по ИКБ считались только 8 административных муниципалитетов (рис. 2)⁶. Традиционно основными переносчиками БЛ в Крыму считались иксодовые клещи I. ricinus (I. persulcatus – на территории Крыма не встречается). Нозоареал БЛ в Крыму совпадает с местами обитания I. ricinus, приурочен к горно-предгорной зоне [8][20–22]. Однако при эпизоотологическом обследовании степной зоны выявлены Ixodes ricinus и Ixodes redikorzevi, что подтверждает более широкий ареал распространения данных видов.

По видовому разнообразию доминирующими видами клещей, содержащих возбудитель БЛ на полуострове, являются клещи рода Ixodes (I. ricinus, I. redikorzevi) (88,1 % из всех положительных находок на БЛ у клещей). При этом только в этих клещах в степной зоне были положительные находки на БЛ. В горно-предгорной зоне положительные находки возбудителя отмечены у 4 видов клещей (D. reticulatus, D. marginatus, H. punctata, H. marginatum). Ранее В. burgdorferi в Крыму была обнаружена только у 4 видов клещей (I. ricinus, I. redikorzevi, H. punctata, D. marginatus) [12].

За период 2017–2021 гг. у 7 видов ММ были выявлены маркеры возбудителя БЛ: белозубки (род Crocidura), серый хомячок (C. migratorius), обыкновенная полевка (M. arvalis (obscurus)), серая крыса (R. norvegicus), общественная полевка (M. socialis), домовая (M. musculus) и степная мышь (S. witherbyi). Ранее положительные находки на полуострове были у 3 видов грызунов (желтогорлая и степная мыши, серый хомячок) [12][21]. Следовательно, нами выявлен более широкий круг ММ, которые могут участвовать в циркуляции Borrelia burgdorferi s.l., чем было выявлено в 2014 году [12].

На территории Крымского полуострова широко распространены иксодовые клещи и ММ, при исследовании которых обнаружены маркеры возбудителей ИКБ, что указывает на повсеместные риски возникновения заболеваний людей. Наряду с этим горно-предгорную зону, как и ранее, можно отнести к зоне высокого риска инфицирования людей [13]. На этой территории маркеры боррелий в пробах от иксодовых клещей были обнаружены в 91,1 % от всех положительных находок в Крыму.

В горно-предгорной зоне на фоне большого количества выявленных положительных проб от иксодовых клещей находки маркеров возбудителя ИКБ в пробах от ММ не обнаружены. При этом на степную зону приходятся 100 % положительных находок маркеров возбудителя ИКБ в пробах от ММ и 8,9 % проб с положительными находками от иксодовых клещей (рис. 3). Можно предположить, что в Крыму существует несколько природных экосистем, связанных с различными боррелиями, в циркуляции которых принимают участие ранее не исследованные нами млекопитающие (белки, ежи и др.), что заслуживает дальнейшего изучения. Клещи могут быть носителями как одного, так и нескольких бактерий (смешанные инфекции) [1][22][23]. Изучение разнообразия боррелий комплекса B. burgdorferi s.l. в Крыму не проводилось. Данная работа определена как перспективная.

Выводы

1. Иксодовые клещевые боррелиозы распространены на всей территории Крымского полуострова.

2. Доминирующие иксодовые клещи, у которых обнаружены маркеры возбудителя ИКБ, относятся к роду Ixodes. В эпизоотический процесс могут быть вовлечены представители родов Dermacentor, Haemaphysalis, Hyalomma.

3. Основную долю от выявленных положительных находок среди ММ составляют пробы от белозубок, серого хомячка и серой крысы. Единичные положительные находки зарегистрированы при исследовании материала от степной и домовой мышей, общественной и обыкновенной полевок.

4. В последние годы практически на всей территории Крымского полуострова регистрируется увеличение количества положительных находок ИКБ при исследовании иксодовых клещей и ММ.

5. Бо́льшая часть положительных находок маркеров ИКБ среди иксодовых клещей зарегистрирована на территории горно-предгорной зоны Крыма, среди ММ – только в степной части полуострова.

6. Вопросы изучения видового разнообразия циркулирующих в Крыму боррелий, уточнения их резервуарных хозяев и переносчиков требуют дальнейшего изучения.