Разработка сухой питательной среды Бонде для выявления Pseudomonas aeruginosa из объектов окружающей среды

Введение. P. aeruginosa включена в состав группы ESKAPE-патогенов, которые обладают высокой устойчивостью к антимикробным препаратам и вызывают большую озабоченность в сфере здравоохранения. Особенностью псевдомонад является способность к образованию биопленок на различных объектах окружающей среды (особенно с повышенной влажностью), которые защищают патоген от воздействия антибиотиков. Для обнаружения P. aeruginosa в объектах окружающей среды, действующие нормативно‑методические документы регламентируют применение культурального метода с использованием накопительной среды Бонде лабораторного приготовления.

Цель исследования: разработка сухой питательной среды Бонде для выявления Pseudomonas aeruginosa из объектов окружающей среды.

Материалы и методы. Проанализированы действующие нормативно-методические документы, регламентирующие к применению питательные среды Бонде для накопления P. aeruginosa. В экспериментах использовали штаммы тест-микроорганизмов, полученные из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур (ГКПМ-Оболенск). Исследования проводили по методам, изложенным в МУК 4.2.2316–08. Для оценки чувствительности и определения показателей эффективности сред применяли целевые штаммы псевдомонад, из разведений 10–7; для оценки ингибирующих свойств сред использовали нецелевые штаммы из разведений 10–4 и 10–5. Пересев из сред Бонде на среду Блеск и питательную среду № 1 ГРМ проводили методом секторных посевов (по Голду). Идентификацию выделенных изолятов из смоделированных образцов проводили с использованием метода матрично-активированной лазерной десорбции (MALDI-TOF).

Результаты. Разработана сухая модифицированная среда Бонде с улучшенными ростовыми свойствами для накопления P. аeruginosa. Отмечена высокая чувствительность модифицированной среды Бонде, позволяющая выявлять P. aeruginosa в незначительных концентрациях (10 КОЕ/мл), и высокая ингибирующая способность в отношении микробов-ассоциантов (10 000 КОЕ/мл). Модифицированная среда Бонде по определению коэффициентов эффективности накопления в отношении всех исследованных штаммов P. aeruginosa превосходила среду Бонде лабораторного приготовления в 1,7–4,8 раза.

Заключение. Применение модифицированной питательной среды Бонде с улучшенными ростовыми свойствами позволит повысить качество и достоверность лабораторных исследований с целью выявления P. aeruginosa при исследовании объектов окружающей среды, в том числе с низким уровнем контаминации. 

1. Бочарова Ю.А., Савинова Т.А., Лямин А.В., Кондратенко О.В., Поликарпова С.В., Жилина С.В., Федорова Н.И., Семыкин С.Ю., Чаплин А.В., Коростин Д.О., Маянский Н.А., Чеботарь И.В. Особенности геномов и антибиотико­ резистентные свойства штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных у пациентов с муковисцидозом в Российской Федерации // Клиническая лабораторная диагностика. 2021. Т. 66. № 10. С. 629-634. doi: 10.51620/0869-2084-2021-66-10-629-634

2. Постников С.С., Теплова Н.В., Костылева М.Н., Грацианская А.Н. Инфекция Pseudomonas aeruginosa в клинической практике // Лечебное дело. 2024. № 3. С. 48–56. doi: 10.24412/2071-5315-2024-13171

3. Никандров В.Н., Пыжова Н.С. О способности синезеленых пигментов pseudomonas aeruginosa расщеплять белки // Вестник Полесского государственного университета. Серия природоведческих наук. 2023. № 1. С. 19-30.

4. Манзенюк О.Ю., Фирстова В.В., Мухина Т.Н., Шемякин И.Г. Молекулярные системы регулирования формирования биопленок бактерий Pseudomonas aeruginosa. Вестник РАМН. 2018. Т. 73. № 4. С. 244–251. doi: 10.15690/vramn1010

5. Zhang X, Zhu Y, Gao Y, Li W, Wang Y, Li Y. Evaluation and analysis of multidrug resistance- and hypervirulence-associated genes in carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa strains among children in an area of China for five consecutive years. Front Microbiol. 2023;14:1280012. doi: 10.3389/fmicb.2023.1280012

6. Гординская Н.А., Бруснигина Н.Ф., Алексеева А.Е., Борискина Е.В., Махова М.А., Шкуркина И.С. Микробиологический мониторинг в системе эпидемиологического надзора за инфекциями, вызванными Pseudomonas aeruginosa // Здоровье населения и среда обитания. 2025. Т. 33. № 1. С. 73–81. doi: 10.35627/2219-5238/2025-33-1-73-81

7. Скурихина Ю.Е., Зайцева Е.А., Сараговец А.А. Моле­ кулярно-генетические особенности антибиотико­ резистентности Pseudomonas aeruginosa // Тихоокеанский медицинский журнал. 2024. Т. 96. №2. С. 47–50. doi: 10.34215/1609-1175-2024-2-47-50

8. Tsolakidis S, Freytag DL, Dovern E, et al. Infections in burn patients: A retrospective view over seven years. Medicina (Kaunas, Lithuania). 2022;58(8):1066. doi: 10.3390/medicina58081066

9. Горяинова А.В., Поликарпова С.В., Семыкин С.Ю., Каширская Н.Ю., Михалаки П.И. Активность тобрамицина в отношении штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных у пациентов с муковисцидозом // Доктор. Ру. 2021. Т. 20. № 3. С. 17–23. doi: 10.31550/1727-2378-2021-20-3-17-23

10. Лямин А.В., Золотов М.О., Кондратенко О.В., Максимова Е.А., Исматуллин Д.Д., Бочкарева П.В. Распространенность резистентных к антимикробным препаратам штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных от пациентов с муковисцидозом // Медицинский совет. 2023. T. 17. № 20. С. 114–120. doi: 10.21518/ms2023-346

11. Носкова О.А., Савилов Е.Д., Чемезова Н.Н., Белькова Н.Л. Антибиотикорезистентность возбудителей генерали­ зованных гнойно-септических инфекций у детей // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2020. T. 19. № 6. С. 56–61. doi: 10.31631/2073-3046-2020-19-6-56-61

12. Потапов А.Ф., Шамаева С.Х., Иванова А.А., Семенова С.В. Микрофлора ран и резистентность к антибиотикам у пострадавших с термической травмой // Тихоокеанский медицинский журнал. 2023. № 1. С. 81–85. doi: 10.34215/1609-1175-2023-1-81-85

13. Садеева З.З., Новикова И.Е., Алябьева Н.М., Лазарева А.В., Карасева О.В., Фисенко А.П. Характеристика Pseudomonas aeruginosa, выделенных из положитель­ных проб гемокультур и ликвора у детей // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2022. T. 99. C. 309–321. doi: 10.36233/0372-9311-241

14. Шеремет А.Б., Нестеренко Л.Н., Зигангирова Н.А. Третья транспортная система Pseudomonas aeruginosa как мишень для разработки антивирулентных препаратов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2020. Т. 38. № 1. С. 3–14. doi: 10.17116/molgen2020380113

15. Ladhani HA, Yowler CJ, Claridge JA. Burn wound colonization, infection, and sepsis. Surg Infect (Larchmt). 2021;22(1):44-48. doi: 10.1089/sur.2020.346

16. Скачкова Т.С., Князева Е.В., Головешкина Е.Н. и др. Распространенность генетических детерминант антибиотикорезистентности, имеющих особое эпидемиологическое значение, в микробиоте мазков со слизистой оболочки ротоглотки больных муковис­ цидозом // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2023. T. 22. № 4. С. 44–48. doi: 10.31631/2073-3046-2023-22-4-44-48

17. Амирхан Р.А., Абдималик М.А., Оразалыева А.К., Мельдебекова А.А. Хронический средний отит: лечение и результаты тимпанопластики // Биология и интегративная медицина. 2026. № 2 (80). С. 70-81.

18. Иванова Л.В., Артемова Т.З., Гипп Е.К., Загайнова А.В., Максимкина Т.Н., Красняк А.В., Корнейчук С.С. Обоснование значимости показателя Pseudomonas aeruginosa при оценке качества питьевой воды // Гигиена и санитария. 2013. №4. С. 29-32

19. Кошелева И.А., Измалкова Т.Ю., Сазонова О.И. и др. Aнтибиотикорезистентные микроорганизмы и детерминанты множественной лекарственной устойчивости у бактерий рода Pseudomonas в очистных сооружениях г. Пущино // Микробиология. 2021. Т. 90. № 2. С. 179–190. doi: 10.31857/50026365621020087

20. Li X, Gu N, Huang TY, Zhong F, Peng G. Pseudomonas aeruginosa: A typical biofilm forming pathogen and an emerging but underestimated pathogen in food processing. Front Microbiol. 2023;13:1114199. doi: 10.3389/fmicb.2022.1114199

21. Леонов А.В., Красняк А.В., Чернышова Л.М. Разработка питательной среды для скрининговой детекции бактерий Pseudomonas aeruginosa // Проблемы безопасности российского общества. Т. 42. № 2. 2023. С. 27-31.

22. Трухина Г.М., Борисова Н.А., Синицына О.О. Влияние нефтепродуктов на микробиом водной среды. Контроль безопасности // Гигиена и санитария. Т. 104. № 12. 2025. С. 1649-1655. doi: 10.47470/0016-9900-2025-104-12-1649-1655

23. Кондратьева Е. И., Лошкова Е.В., Чернуха М.Ю., Шагинян И.А. Синегнойная инфекция в детском возрасте: современное состояние проблемы // Педиатрия. Журнал им. Г.Н. Сперанского. Т. 95. № 4. 2016. С. 187-197.

24. Тымчук С.Н., Спиридонова Е.Ю., Бугаевская Л.В. Подходы к определению Pseudomonas aeruginosa в воде в национальной и международной нормативно-методической базе // Аналитика. Т. 13. № 4. 2023. С. 300-305. doi: 10.22184/2227-572X.2023.13.4. 300.305

25. Тымчук С.Н., Ахапкина Е.Н., Ларин В.Е., Буданова Е.В., Нечаев Д.Н. Шаг вперед, два шага назад. Эффективность методик определения Pseudomonas aeruginosa в воде // Контроль качества продукции. 2017. № 11. С. 49-56.

26. Полосенко О.В., Сёмина А.Ю., Храмов М.В., Трухина Г.М. Подходы к усовершенствованию методов выделения и идентификации синегнойной палочки // Здоровье населения и среда обитания. 2026. Т. 34. № 3. С. 60-67. doi: 10.35627/10.35627/2219-5238/2026-34-3-60-67

27. Луканин А.В. Инженерная биотехнология: основы технологии микробиологических производств. Учебное пособие. М., 2024. 304 c. doi: 10.12737/18209.