Сёмина Анастасия Юрьевна – младший научный сотрудник лаборатории микробиологических и физико-химических методов анализ
п. Оболенск, 142279
Anastasia Yu. Semina, Junior Researcher, Laboratory of Microbiological and Physicochemical Methods of Analysis
24 “Quarter A” Territory, Obolensk Settlement, Serpukhov City District, Moscow Region, 142279
Полосенко Ольга Вадимовна – к.б.н., ведущий научный сотрудник Научно-производственного отдела профилактических и диагностических препаратов
п. Оболенск, 142279
Olga V. Polosenko, Cand. Sci. (Biol.), Leading Researcher, Science and Production Department of Preventive and Diagnostic Drugs
24 “Quarter A” Territory, Obolensk Settlement, Serpukhov City District, Moscow Region, 142279
Храмов Михаил Владимирович – к.м.н., заместитель директора по качеству и развитию
п. Оболенск, 142279
Mikhail V. Khramov, Cand. Sci. (Med.), Deputy Director for Quality and Development
24 “Quarter A” Territory, Obolensk Settlement, Serpukhov City District, Moscow Region, 142279
Трухина Галина Михайловна – д.м.н., профессор, заведующая отделом микробиологических методов исследования окружающей среды
ул. Семашко, д. 2, г. Мытищи, 141014
Galina M. Trukhina, Dr. Sci. (Med.), Prof., Head of the Department of Microbiological Methods of Environmental Research
2 Semashko Street, Mytishchi, Moscow Region, 141014
Борисова Наталья Андреевна – научный сотрудник отдела микробиологических методов исследования окружающей среды
ул. Семашко, д. 2, г. Мытищи, 141014
Natalia A. Borisova, Researcher, Department of Microbiological Methods of Environmental Research
2 Semashko Street, Mytishchi, Moscow Region, 141014
Введение. P. aeruginosa включена в состав группы ESKAPE-патогенов, которые обладают высокой устойчивостью к антимикробным препаратам и вызывают большую озабоченность в сфере здравоохранения. Особенностью псевдомонад является способность к образованию биопленок на различных объектах окружающей среды (особенно с повышенной влажностью), которые защищают патоген от воздействия антибиотиков. Для обнаружения P. aeruginosa в объектах окружающей среды, действующие нормативно‑методические документы регламентируют применение культурального метода с использованием накопительной среды Бонде лабораторного приготовления.
Цель исследования: разработка сухой питательной среды Бонде для выявления Pseudomonas aeruginosa из объектов окружающей среды.
Материалы и методы. Проанализированы действующие нормативно-методические документы, регламентирующие к применению питательные среды Бонде для накопления P. aeruginosa. В экспериментах использовали штаммы тест-микроорганизмов, полученные из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур (ГКПМ-Оболенск). Исследования проводили по методам, изложенным в МУК 4.2.2316–08. Для оценки чувствительности и определения показателей эффективности сред применяли целевые штаммы псевдомонад, из разведений 10–7; для оценки ингибирующих свойств сред использовали нецелевые штаммы из разведений 10–4 и 10–5. Пересев из сред Бонде на среду Блеск и питательную среду № 1 ГРМ проводили методом секторных посевов (по Голду). Идентификацию выделенных изолятов из смоделированных образцов проводили с использованием метода матрично-активированной лазерной десорбции (MALDI-TOF).
Результаты. Разработана сухая модифицированная среда Бонде с улучшенными ростовыми свойствами для накопления P. аeruginosa. Отмечена высокая чувствительность модифицированной среды Бонде, позволяющая выявлять P. aeruginosa в незначительных концентрациях (10 КОЕ/мл), и высокая ингибирующая способность в отношении микробов-ассоциантов (10 000 КОЕ/мл). Модифицированная среда Бонде по определению коэффициентов эффективности накопления в отношении всех исследованных штаммов P. aeruginosa превосходила среду Бонде лабораторного приготовления в 1,7–4,8 раза.
Заключение. Применение модифицированной питательной среды Бонде с улучшенными ростовыми свойствами позволит повысить качество и достоверность лабораторных исследований с целью выявления P. aeruginosa при исследовании объектов окружающей среды, в том числе с низким уровнем контаминации.
Introduction: P. aeruginosa belongs to ESKAPE pathogens, which are highly resistant to antimicrobials and pose a significant public health challenge. Pseudomonas is characterized by its ability to form biofilms on various environmental surfaces (especially in humid environments), which protect the pathogen from antibiotic exposure. To detect P. aeruginosa in environmental samples, current regulatory documents require the use of a culture method using laboratory-prepared Bonde’s culture medium.
Objective: To develop a dry Bonde nutrient medium to detect Pseudomonas aeruginosa in environmental samples.
Materials and Methods: The current regulatory and methodological documents regulating the use of Bonde nutrient media for the accumulation of P. aeruginosa are analyzed. The experiments used strains of test microorganisms obtained from the State Collection of Pathogenic Microorganisms and Cell Cultures (SCPMCC-Obolensk). The studies were carried out according to the methods described in MG. 4.2.2316–08. To assess sensitivity and determine the effectiveness of media, we used target strains of pseudomonads at a 10–7 dilution as well as non-target strains at 10–4 and 10–5 dilutions to evaluate the inhibitory properties of the media. Subculturing from the Bonde medium to Gloss (“Blesk”) medium and nutrient medium No. 1 was carried out using the Gould sector sowing method. The isolates from simulated samples were identified by matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry.
Results: We created a dry modified Bonde medium promoting a faster growth of P. aeruginosa. It demonstrated high sensitivity enabling the detection of low amounts of the bacteria (10 CFU/mL) and high inhibitory capacity against associated microbes (10,000 CFU/mL). The modified Bonde medium was 1.7 to 4.8 times more effective than the laboratory-prepared Bonde medium in terms of accumulation of all P. aeruginosa strains under study.
Conclusion: Application of the improved Bonde growth medium will enhance the quality and reliability of detection of P. aeruginosa in environmental samples including those with low levels of contamination.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.