Совершенствование методов оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в системе санитарно-бактериологических исследований объектов внешней среды медицинских организаций

Введение. Мониторинг устойчивости микроорганизмов к используемым дезинфицирующим средствам в медицинских организациях, позволяет предотвратить или снизить риски распространения возбудителей инфекционных заболеваний в окружающей среде. Вместе с тем, микробиологические лаборатории сталкиваются с трудностями в связи с отсутствием готовой формы нейтрализатора, который применяется в ходе исследований объектов внешней среды для исключения действия на микробные клетки остаточных количеств дезинфицирующих средств.

Цель исследования: усовершенствовать метод оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам с применением агара с нейтрализующими компонентами.

Материалы и методы. В качестве агара с нейтрализующим компонентом использован нейтрализующий агар Ди-Ингли, содержащий декстрозу 1,0 %, казеиновый пептон 0,5 %, дрожжевой экстракт 0,25 %, лецитин 0,7 %, тиосульфат натрия 0,6 %, твин-80 0,5 %. Эффективность нейтрализации четвертичных аммониевых соединений, альдегидов, хлорактивных и кислородвактивных соединений оценивали в отношении санитарно-показательных микроорганизмов S. aureus ATCC 6538P и E. coli ATCC 10536. В качестве тест-объектов использовали пластиковую поверхность (дно 12-луночных планшетов). Всего проведено 122 исследований с различными растворами дезинфицирующих средств в рекомендованных концентрациях, согласно инструкциям по применению. Статистическую обработку результатов проводили при помощи компьютерных программ Microsoft Office Excel 2016.

Результаты. Эффективность нейтрализации остаточных количеств дезинфицирующих средств на основе четвертичных аммониевых соединений с использованием нейтрализующего агара Ди-Ингли составила 95,18 ± 3,2 %; альдегидов – 98,1 ± 2,1 %; хлорактивных соединений – (93,6 ± 2,4) %; кислородактивных соединений – 71,4 ± 5,5 %. При валидации применяемой методики отклонений полученных результатов от установленных критериев приемлемости относительно утвержденной методики оценки чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам не выявлено.

Заключение. Результаты исследования свидетельствуют о возможности использования нейтрализующего агара Ди-Ингли в методике по определению чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам. Преимуществами предложенного способа являются стандартизация процесса, снижение материальных и временных затрат.

1. DeBaun MR, Lai C, Sanchez M, et al. Antibiotic re­sistance: Still a cause of concern? OTA Int. 2021;4(3 Suppl):e104(1-4). doi: 10.1097/OI9.0000000000000104

2. Prestinaci F, Pezzotti P, Pantosti A. Antimicrobi­al resistance: A global multifaceted phenomenon. Pathog Glob Health. 2015;109(7):309-318. doi: 10.1179/2047773215Y.0000000030

3. WHO Global Action Plan on Antimicrobial Resistan­ce. Geneva, Switzerland; 2015. Accessed Septem­ber 5, 2025. http://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/193736/9789241509763_eng.pdf?sequence=1.pdf

4. Fernandes ÂR, Rodrigues AG, Cobrado L. Effect of prolonged exposure to disinfectants in the antimicro­bial resistance profile of relevant micro-organisms: A systematic review. J Hosp Infect. 2024;151:45-59. doi: 10.1016/j.jhin.2024.04.017

5. Беляева Е.В., Ермолина Г.Б., Шкуркина И.С., Борискина Е.В., Кряжев Д.В. Оценка чувствительности к дезинфектантам коагулазонегативных стафилококков, циркулирующих в детском стационаре // Здоровье населения и среда обитания. 2019. № 8 (317). С. 20- 24. doi:10.35627/2219-5238/2019-317-8-20-24

6. Брусина Е.Б., Ковалишена О.В., Цигельник А.М. Инфекции, связанные с оказанием медицинской помощи в хирургии: тенденции и перспективы профилактики // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2017. Т. 16. № 4. С. 73-80. doi: 10.31631/2073-3046-2017-16-4-73-80

7. Захарова Ю.А., Фельдблюм И.В. Сравнительная характеристика микрофлоры, выделенной из очагов гнойно-септических инфекций с множественными и единичными случаями // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2009. № 5. С. 16-21.

8. Покровский В.И., Акимкин В.Г., Брико Н.И., Брусина Е.Б., Захарова Ю.А. и др. Пути совершенствования лабораторной диагностики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи // Медицинский альманах. 2012. № 2 (21). С. 12-16.

9. Avershina E, Shapovalova V, Shipulin G. Fighting antibiotic resistance in hospital-acquired infections: Current state and emerging technologies in disease prevention, diagnostics and therapy. Front Microbiol. 2021;12:707330. doi: 10.3389/fmicb.2021.707330

10. Rozman U, Pušnik M, Kmetec S, Duh D, Šostar Turk S. Reduced susceptibility and increased resistance of bacteria against disinfectants: A systematic review. Microorganisms. 2021;9(12):2550. doi: 10.3390/micro­organisms9122550

11. Федорова, Л.С., Ильякова А.В. Актуальные вопросы резистентности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам // Дезинфекционное дело. 2022. № 4 (122). С. 50-54. doi: 10.35411/2076-457X-2022-4-50-54

12. Merchel Piovesan Pereira B., Tagkopoulos I. Benzalko­nium chlorides: Uses, regulatory status, and microbial resistance. Appl Environ Microbiol. 2019;85(13):e00377- 19. doi: 10.1128/aem.00377-19

13. Серов А.А., Шестопалов Н.В., Гололобова Т.В., Федорова Л.С., Храпунова И.А., Меркульева А.Д. Роль дезинфектологических исследований в организации комплекса профилактических мероприятий // Гигиена и санитария. 2020. Т. 99. № 3. С. 235-241. doi: https://doi.org/10.33029/0016-9900-2020-99-3-235-241

14. Найговзина Н.Б., Попова А.Ю., Бирюкова Е.Е., Ежлова Е.Б. и др. Оптимизация системы мер борьбы и профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи, в Российской Федерации // Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2018. № 1. С. 6-14.

15. Шестопалов Н.В., Федорова Л.С., Серов А.А. и др. Проблемы мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в медицинских организациях // Дезинфекционное дело. 2018. Т. 104. № 2. С. 14-22.

16. Zhang M, Kong G, Li Y, Li Y, Xu Y. Monitoring and analysis of pathogenic microorganisms and resistance genes. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2024;70(4):181-190. doi: 10.14715/cmb/2024.70.4.29

17. Brauge T, Chalivat E, Leleu G, Colas A, Midelet G. Impact of disinfectant-neutralizing buffers used for sampling methods on the viability of adherent Listeria monocytogenes cells on surfaces. FEMS Microbiol Lett. 2025;372:fnaf048. doi: 10.1093/femsle/fnaf048

18. Dey BP, Engley FB Jr. Comparison of Dey and Engley (D/E) neutralizing medium to Letheen medium and standard methods medium for recovery of Staphylo­coccus aureus from sanitized surfaces. J Ind Microbiol. 1995;14(1):21-25. doi: 10.1007/BF01570061

19. Kwakman JA, Vos MC, Bruno MJ. Higher yield in duode­noscope cultures collected with addition of neutralizing agent. J Hosp Infect. 2023;132:28-35. doi: 10.1016/j.jhin.2022.11.008

20. O’Reilly P, Loiselle G, Darragh R, Slipski C, Bay DC. Reviewing the complexities of bacterial biocide suscep­tibility and in vitro biocide adaptation methodologies. NPJ Antimicrob Resist. 2025;3(1):39. doi: 10.1038/s44259-025-00108-0

21. West AM, Teska PJ, Lineback CB, Oliver HF. Strain, di­sinfectant, concentration, and contact time quantitatively impact disinfectant efficacy. Antimicrob Resist Infect Control. 2018;7:49. doi: 10.1186/s13756-018-0340-2

22. Еремеева Н.И., Кравченко М.А., Канищев В.В. Способ определения эффективности дезинфицирующих средств, применяемых в противотуберкулезных учреждениях // Патент Российской Федерации на изобретение №2364629 от 20 августа 2009 г.

23. Bodie AR, Dittoe DK, Feye KM, Knueven CJ, Ovall C, Ricke SC. Comparison of ready-to-eat „organic” anti­microbials, sodium bisulfate, and sodium lactate, on Listeria monocytogenes and the indigenous microbiome of organic uncured beef frankfurters stored under refrige­ration for three weeks. PLoS One. 2022;17(1):e0262167. doi: 10.1371/journal.pone.0262167

24. Li F, Xian Z, Kwon HJ, et al. Comparison of three ne­utralizing broths for environmental sampling of low levels of Listeria monocytogenes desiccated on stainless steel surfaces and exposed to quaternary ammonium compounds. BMC Microbiol. 2020;20(1):333. doi: 10.1186/s12866-020-02004-1

25. Mohammad ZH, Hasan AA, Kerth CR, Riley DG, Taylor TM. Increased effectiveness of microbiological verification by concentration-dependent neutralization of sanitizers used in poultry slaughter and fabrication allowing Salmonella enterica survival. Foods. 2018;7(3):32. doi: 10.3390/foods7030032

26. Park YJ, Chen J. Mitigating the antimicrobial activities of selected organic acids and commercial sanitizers with various neutralizing agents. J Food Prot. 2011;74(5):820- 825. doi: 10.4315/0362-028X.JFP-10-447

27. Reichel M, Heisig P, Kampf G. Pitfalls in efficacy testing – how important is the validation of neutralization of chlorhexidine digluconate? Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2008;7:20. doi: 10.1186/1476-0711-7-20

28. Zhu L, Stewart D, Reineke K, et al. Comparison of swab transport media for recovery of Listeria monocytogenes from environmental samples. J Food Prot. 2012;75(3):580- 584. doi: 10.4315/0362-028X.JFP-11-386